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发布时间:2020-06-10 02:40:00
湿法装柱:一般是将树脂装至柱高的三分之二处,用水进行反洗,使树脂松散,展开,将树脂的微细粉末及一些机械杂质去除。然后放出水,至水面略高于树脂的层面,接着用酒精以适当的流速淋洗,至流出的酒精中无油溶性杂质为止,后用水洗出酒精即可使用,这样可以洗去小分子有机物。
吸附层析流动相选择:考虑被分离物质性质,吸附剂的活性,展开剂的极性。
分配层析法:基于混合物各组分在固定相与流动相之间的分配性质不同而实施的一种层析方法。原理:当一种溶质分布在两个互不相容的溶剂中时,它在固定相和流动相两相内的的浓度之比是个常数,成为分配系数。
分配层析分离各种不同的化合物的本质是化合物在两相中的分配系数因为化合物结构不同而产生分配系数的差异。
起步期在层析技术发展之初,制备液相,对于一些物质的分离方式都处在比较原始的状态,并且分离的结果也并不是很理想。
bio-rad***谈到层析技术是在1903~1906年由俄国植物学家M.Tswett首先提出来的。
那时,他将叶绿素的溶液倒入碳酸钙管柱,并继续以淋洗,由于碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附能力不同,所以色素被逐渐分离,在管柱中出现了不同的色谱图。于是就称这种混合物的分离方法为,有色的图谱法(Chromato graphy),简称色谱法,又叫层析法。不过,当时这种方法并未引起人们的注意。
色谱条件的选择
由于中药有效成分类型不同,性质各异,所以选择色谱条件是不同的。
一般生物1碱的分离可用硅胶或氧化铝柱色谱,对于极性较高的生物1碱可用分配色谱,而对季铵型水溶性生物1碱也可用分配色谱或离子交换色谱。
苷类的色谱分离往往决定于苷元的性质,如皂苷、苷,一般可用分配色谱或硅胶吸附色谱。
挥发油、甾体、萜类包括萜类内酯,往往氧化铝及硅胶色谱。
黄酮类化合物、鞣质等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附色谱。
有机酸、氨基酸一般可选用离子交换色谱,有时也用分配色谱。有些氨基酸也可用活性炭吸附色谱。
对于大分子化合物,如多肽、蛋白质、多糖,常用凝胶色谱。
总的来说,对非极性成分往往考虑用氧化铝或硅胶吸附色谱;若极性较大则采用分配色谱或弱吸附剂吸附色谱;对酸性、碱性、成分可采用离子交换色谱,有时也可用吸附色谱及分配色谱等。
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