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发布时间:2020-06-16 00:00:07
吸附层析:指的是层析固定相与流动相在相对移动过程中,溶质和溶剂分子在吸附剂表面上的活性位点相互竞争的吸附过程。
吸附层析常用固定相:氧化铝硅胶活性炭 聚酰胺
吸附层析固定相选择: (1) 样品的溶解性;水溶性样品如糖类化合物、某些苷类用活性炭分离。反相层析在吸附层析中,性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。黄酮类化合物则主要采用聚酰胺分离,绝大部分有机化合物可以采用硅胶和氧化铝作为固定相(2) 样品的酸性:硅胶略酸适用于弱酸和中性物质分离,氧化铝适用于碱性物质分离(3) 化合物的极性: (4) 吸附剂对组分的作用
色谱条件的选择
由于中药有效成分类型不同,性质各异,所以选择色谱条件是不同的。
一般生物1碱的分离可用硅胶或氧化铝柱色谱,对于极性较高的生物1碱可用分配色谱,而对季铵型水溶性生物1碱也可用分配色谱或离子交换色谱。
苷类的色谱分离往往决定于苷元的性质,如皂苷、苷,一般可用分配色谱或硅胶吸附色谱。
挥发油、甾体、萜类包括萜类内酯,往往氧化铝及硅胶色谱。
黄酮类化合物、鞣质等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附色谱。
有机酸、氨基酸一般可选用离子交换色谱,有时也用分配色谱。有些氨基酸也可用活性炭吸附色谱。
对于大分子化合物,如多肽、蛋白质、多糖,常用凝胶色谱。
总的来说,对非极性成分往往考虑用氧化铝或硅胶吸附色谱;若极性较大则采用分配色谱或弱吸附剂吸附色谱;对酸性、碱性、成分可采用离子交换色谱,有时也可用吸附色谱及分配色谱等。
与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍,它缩短了分析时间,同时减少了溶剂用量降低了分析成本。不过由于实验过程中仪器内部压力过大,也会产生相对应的问题。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,洗下来,得到较好的分离效果。例如泵的使用寿命会相对降低,仪器的连接部位老化速度加快,包括单向阀等部位零件容易出现问题等。
如今,超液相色谱仪主要应用于(1)分析 如天然产物中复杂组分的分析(2)生化分析 如蛋白质、多肽、代谢组学等生化样品(3)食品分析 如食品中残留的检测(4)环境分析 如水中微囊藻的检测(5)其他 如化妆品中的检测
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